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传统的组织活检,因其局限性,如肿瘤的异质性、肿瘤患者无法进行手术、某些肿瘤解剖位置不便进行穿刺及穿刺自身的临床风险等,可能导致患者无法获得针对性治疗;液体活检(Liquid biopsy)作为组织活检的补充,通过非侵入性取样降低活检危害,在动态监测肿瘤进展和治疗反应等领域获得临床认可,已成为肿瘤精准医疗领域炙手可热的明星技术。上个月底美国医疗保险机构Palmetto宣布将体细胞变异ctDNA分析测试纳入其保险范围,可见液体活检(ctDNA检测)的临床价值已获得医?;沟娜峡?,并有望在临床推广。

液体活检的检测对象主要有CTC、ctDNA、循环microRNA和Exsome(外泌体),其中,ctDNA可应用于肿瘤的早期诊断、动态监测肿瘤的发生发展及疗效、耐药检测、复发风险评估等,在肿瘤诊治中前景广阔,受到越来越多的关注。
ctDNA是由肿瘤细胞释放到血浆中的单链或者双链DNA,携带有与原发肿瘤组织相一致的分子遗传学改变。是一种特征性的肿瘤生物标记物,并且可以被定性、定量和追踪。但由于ctDNA含量低(<1.0%总cfDNA),片段短(180-200bp),半衰期短(~2小时),故其检测对痕量核酸检测技术提出全新的挑战。

液体活检能否真正落实到临床应用,有赖于检测技术的临床普及。目前具备极微量核酸基因突变检测能力的技术主要有ARMS技术(包括Super-ARMS)、第二代测序(NGS)和数字PCR(ddPCR,包括BEAMing技术),这些技术也是近期液体活检专家共识中推荐的检测技术。

ARMS技术是目前欧盟及中国CFDA批准用于临床的血液检测方法,更是血液EGFR突变检测专家共识推荐的技术。ARMS技术具有简便快速,特异性好,技术普及度高等特点,非常适合医院广泛开展。作为肿瘤液体活检临床上唯一获得法规支持的检测技术,EGFR突变血液检测产品(采用ADx-ARMS法)已广泛应用于临床诊断,让越来越多的患者受益。同时,ARMS技术自身也在不断升级改造,Super-ARMS是ARMS技术的升级版,敏感度进一步提高。随着相关检测试剂盒的开发和产业化,未来有望成为普及性的临床血液检测方法。

NGS技术可检测未知突变且检测基因数量不受限,在检测灵敏度方面亦有潜力可以挖掘,在肿瘤耐药突变的监测与研究等领域有很大的应用潜力。然而,NGS建库技术复杂,常规建库测序方法使得血浆中含量极低的肿瘤信号完全淹没在背
景噪声中,建库过程原始信息丢失严重或成为敏感度潜力发挥的限制因素。同时,由于NGS技术专业要求高、检测流程及信息解读标准化、检测时间过长、费用过高等限制了其临床应用。因此,NGS技术要实现在液体活检中的临床应用,
还有许多问题亟待解决。

数字PCR技术,具有极高的敏感性,可绝对定量;但该方法检测通量较低,且不能检测融合变异,目前应用此技术进行ctDNA检测的试剂盒尚待开发中。值得一提的是,作为检测已知基因变异位点的检测技术,数字PCR技术与Super-ARMS技术具有高度的检测一致性,且检测灵敏度相当,从临床普及性上来看,Super-ARMS更适合于临床应用推广。

液体活检还处于行业发展的早期,还有一些问题亟待解决,如提高检测技术的灵敏度和特异性、血液采集系统和分析步骤等的标准化等。液体活检已获得临床医生的广泛认可,新的技术、方法和应用都在快速涌现。随着未来越来越多ctDNA检测技术的介入,检测的终端价格有望降低,这将有利于液体活检的临床推广,加速肿瘤精准医疗的医学革命进程,惠及更多患者。 
 
 
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